摘要：以抗寒月季帶腋芽莖段為外植體。結(jié)果表明：在MS+6-BA1.0~3.0mg/l+NAA0.10mg/l培養(yǎng)基上進(jìn)行起始培養(yǎng)，其腋芽生長(zhǎng)到2~3厘米時(shí)轉(zhuǎn)接到MS+6-BA2.0-3.0mg/l+NAA0.1mg/l的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，30天其增殖倍數(shù)在3~4倍以上，且長(zhǎng)成的芽苗比較粗壯;增殖后的芽苗在1/2MS+NAA0.5~1.0mg/l或IBA0.5~0.8mg/l的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，根系生長(zhǎng)良好，30天小苗發(fā)根率達(dá)90%以上，經(jīng)煉苗后移栽在以草碳和珍珠巖(體積比1:1)基質(zhì)中，成活率達(dá)85%以上，當(dāng)小苗長(zhǎng)到10厘米左右移植于田間栽培，60~90天后可陸續(xù)現(xiàn)蕾開(kāi)花.
關(guān)鍵詞:抗寒月季；組織培養(yǎng)；快速繁殖；帶腋芽莖段
月季是薔薇屬的木本花卉，有“花中皇后”的美譽(yù)，深受人們的喜愛(ài).為我國(guó)十大名花之一，在我國(guó)有30多個(gè)城市將其選為市花?？购录臼墙鼛啄赀x育出來(lái)的能夠適應(yīng)北方寒冷氣候特點(diǎn)的新的月季品種，以其花大，色艷、花期長(zhǎng)被北方園林綠化彩化中廣泛應(yīng)用，但由于其繁殖以扦插繁殖為主，繁殖速度慢，滿足不了生產(chǎn)發(fā)展的需要，而組織培養(yǎng)可在短期內(nèi)獲得大量的優(yōu)良種苗，為此，我們于2003~2006年開(kāi)展了抗寒月季組培快繁的研究工作。
1材料與方法
1.1材料
試驗(yàn)所用的材料為長(zhǎng)春市園林科學(xué)研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。
1.2方法
1．2．1外植體的準(zhǔn)備
取生長(zhǎng)健壯優(yōu)良母株上帶有腋芽的嫩莖，摘除葉片和嫩刺，用自來(lái)水沖洗干凈后，用浸有75%的酒精棉球擦拭表面5~10S，剪成3~5厘米左右的莖段，在超凈工作臺(tái)上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，無(wú)菌水沖洗3~5次，再用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，切成帶有1個(gè)或2個(gè)腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中。
1．2．2腋芽的分化與增殖
把外植體分別接種于添加6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行起始培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)建立無(wú)菌快速繁殖無(wú)性系，再將無(wú)菌小苗剪切成1~2厘米左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時(shí)間后對(duì)小苗的增殖與生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)分析，培養(yǎng)基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培養(yǎng)溫度（25+-3），每天光照為11~12小時(shí)，光照強(qiáng)度1000~1500LX。
1．2．3生根與移栽
將增殖后長(zhǎng)勢(shì)旺盛、節(jié)間紳長(zhǎng)適度的無(wú)根小苗轉(zhuǎn)接到1/2MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，30天后觀察生根情況。
生根后的試管苗在常溫下煉苗5~7天，移栽到草碳+珍珠巖（體積比為1∶1）的基質(zhì)中，待成活后小苗高達(dá)10厘米左右移到田間種植。
2結(jié)果與討論
2．1腋芽分化
將外植體接種到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后，大部分外植體開(kāi)始萌動(dòng)，10天腋芽膨大明顯，隨后長(zhǎng)出嫩芽形成無(wú)根芽從。
為選擇出不同質(zhì)量濃度6-BA對(duì)誘導(dǎo)腋芽分化的影響，以MS為基本培養(yǎng)基配制7種附加不同質(zhì)量濃度（分別為0.10.51.01.52.03.04.0）的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每組培養(yǎng)基接種40個(gè)外植體，培養(yǎng)40天觀察其腋芽分化情況（見(jiàn)表1）。
表1表明，月季腋芽分化率與培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度呈拋物線關(guān)系，6-BA由0.1增加至3.0時(shí)腋芽分化率明顯提高，以3.0為，腋芽分化率達(dá)77.5%;當(dāng)6-BA的質(zhì)量繼續(xù)增加時(shí)，其腋芽分化率則明顯下降;6-BA質(zhì)量濃度為0.1時(shí)其腋芽分化率，僅為7.5%;6-BA質(zhì)量濃度為5.0時(shí)，其腋芽分化率只為15%，可見(jiàn)，培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為1.5~3.0時(shí)有利于誘導(dǎo)腋芽分化，尤其以2.0~3.0時(shí)為。
2.2繼代增殖培養(yǎng)
取自同一種培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)、大小一致的繼代培養(yǎng)芽和莖段，同時(shí)接種到不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天后進(jìn)行觀察并統(tǒng)計(jì)結(jié)果（見(jiàn)表2）。
由表2可以看出，在NAA質(zhì)量濃度相同而6-BA質(zhì)量濃度不同的處理中，隨著6-BA濃度的升高（1.5~3.0）芽苗的增殖倍數(shù)也相應(yīng)提高，NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數(shù)高達(dá)6.6~6.8倍；可見(jiàn)，培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為3.0、NAA質(zhì)量濃度為0.05時(shí)為的誘導(dǎo)腋芽分化的處理組合。
2．3生根培養(yǎng)
無(wú)菌芽苗在分化與增殖培養(yǎng)基中只誘導(dǎo)地上部分，既不斷地分枝增殖，曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開(kāi)花現(xiàn)象，但均不易生根。因此，將原來(lái)培養(yǎng)基中的大量元素減半（既1/2MS），并去除BA進(jìn)行根的誘導(dǎo)。結(jié)果在無(wú)菌苗根的誘導(dǎo)過(guò)程中，生長(zhǎng)素的種類和使用濃度起決定性作用，為此對(duì)不同種類的生長(zhǎng)素NAA、IBA、A、IAA的根效應(yīng)作對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明，NAA、IBA對(duì)抗寒月季無(wú)菌苗誘根效應(yīng)明顯優(yōu)于IAA，但兩者之間差異不明顯，用IAA進(jìn)行根的誘導(dǎo)，芽苗基部長(zhǎng)出較多的愈傷組織，發(fā)根率低，且發(fā)根量少，移栽成活率下降，這可能是因?yàn)樯L(zhǎng)過(guò)多的愈傷組織影響根系維管束的發(fā)育所致，為為了解NAA和IBA的適宜質(zhì)量濃度，進(jìn)行了NAA和IBA的質(zhì)量濃度試驗(yàn)，分別設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，培養(yǎng)30天后觀察根系生長(zhǎng)情況，表3表明，以1/2MS（大量元素用量減半）+NAA和1/2MS（大量元素用量減半）+IBA培養(yǎng)基對(duì)月季根的誘導(dǎo)效果均較為理想，而且濃度都在0.3-0.75mg/l范圍內(nèi)Zui為適合，但以NAA為。其中NAA生根率達(dá)92%，移栽成活率高達(dá)89%，IBA的生根率也高達(dá)90%，移栽成活率達(dá)87%。
將小苗接種到上述培養(yǎng)基中10天后其基部傷口基本愈合，18天則長(zhǎng)出許多小白根，培養(yǎng)30天發(fā)根率均達(dá)90%以上，且長(zhǎng)有3條以上，長(zhǎng)度達(dá)2.0厘米以上白根的占80%以上。
2．4煉苗移栽
在生根培養(yǎng)基中，無(wú)菌苗生長(zhǎng)迅速，植株逐漸健壯起來(lái)，其根系生長(zhǎng)尤為迅速，在多數(shù)根系長(zhǎng)達(dá)1.0厘米，其根尖仍保持旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，此時(shí)即可進(jìn)入過(guò)度栽培（煉苗）階段，移栽前先將瓶苗移出恒溫培養(yǎng)室，在常溫下置于較強(qiáng)散射光中煉苗7天，打開(kāi)瓶蓋后繼續(xù)煉苗2~7天，然后小心取出放入清水中清洗干凈，注意少傷根，移栽到以草碳土+珍珠巖（體積比1∶1）的基質(zhì)中，澆透水并覆蓋塑料膜，保持相對(duì)濕度85~90%，溫度15~25℃，10天后逐漸揭膜煉苗，15~20天可將塑料膜全部揭除，并澆施營(yíng)養(yǎng)液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，其成活率一般可達(dá)70%以上，待小苗長(zhǎng)至10~15厘米左右時(shí)，就可移植到田間定植。
參考文獻(xiàn)
［1］李正平.月季試管繁殖和移栽中幾個(gè)因素的研究［J］.園藝學(xué)報(bào)，1988，15（2）：131
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