月季是薔薇屬的木本花卉,有“花中皇后”的美譽(yù),深受人們的喜愛(ài).為我國(guó)十大名花之一,在我國(guó)有30多個(gè)城市將其選為市花??购录臼墙鼛啄赀x育出來(lái)的能夠適應(yīng)北方寒冷氣候特點(diǎn)的新的月季品種,以其花大,色艷、花期長(zhǎng)被北方園林綠化彩化中廣泛應(yīng)用,但由于其繁殖以扦插繁殖為主,繁殖速度慢,滿(mǎn)足不了生產(chǎn)發(fā)展的需要,而組織培養(yǎng)可在短期內(nèi)獲得大量的優(yōu)良種苗,為此,我們于2003~2006年開(kāi)展了抗寒月季組培快繁的研究工作。
1材料與方法
1.1材料
試驗(yàn)所用的材料為長(zhǎng)春市園林科學(xué)研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。
1.2方法
1.2.1外植體的準(zhǔn)備
取生長(zhǎng)健壯優(yōu)良母株上帶有腋芽的嫩莖,摘除葉片和嫩刺,用自來(lái)水沖洗干凈后,用浸有75%的酒精棉球擦拭表面5~10S,剪成3~5厘米左右的莖段,在超凈工作臺(tái)上,用0.1%升汞溶液消毒10~12分,無(wú)菌水沖洗3~5次,再用無(wú)菌濾紙吸干表面水分,切成帶有1個(gè)或2個(gè)腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中。
1.2.2腋芽的分化與增殖
把外植體分別接種于添加6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行起始培養(yǎng),誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)建立無(wú)菌快速繁殖無(wú)性系,再將無(wú)菌小苗剪切成1~2厘米左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng),培養(yǎng)一定時(shí)間后對(duì)小苗的增殖與生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)分析,培養(yǎng)基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培養(yǎng)溫度(25+-3),每天光照為11~12小時(shí),光照強(qiáng)度1000~1500LX。
1.2.3生根與移栽
將增殖后長(zhǎng)勢(shì)旺盛、節(jié)間紳長(zhǎng)適度的無(wú)根小苗轉(zhuǎn)接到1/2MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,30天后觀察生根情況。
生根后的試管苗在常溫下煉苗5~7天,移栽到草碳+珍珠巖(體積比為1∶1)的基質(zhì)中,待成活后小苗高達(dá)10厘米左右移到田間種植。
2結(jié)果與討論
2.1腋芽分化
將外植體接種到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后,大部分外植體開(kāi)始萌動(dòng),10天腋芽膨大明顯,隨后長(zhǎng)出嫩芽形成無(wú)根芽從。
為選擇出不同質(zhì)量濃度6-BA對(duì)誘導(dǎo)腋芽分化的影響,以MS為基本培養(yǎng)基配制7種附加不同質(zhì)量濃度(分別為0.10.51.01.52.03.04.0)的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,每組培養(yǎng)基接種40個(gè)外植體,培養(yǎng)40天觀察其腋芽分化情況(見(jiàn)表1)。
表1表明,月季腋芽分化率與培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度呈拋物線(xiàn)關(guān)系,6-BA由0.1增加至3.0時(shí)腋芽分化率明顯提高,以3.0為,腋芽分化率達(dá)77.5%;當(dāng)6-BA的質(zhì)量繼續(xù)增加時(shí),其腋芽分化率則明顯下降;6-BA質(zhì)量濃度為0.1時(shí)其腋芽分化率,僅為7.5%;6-BA質(zhì)量濃度為5.0時(shí),其腋芽分化率只為15%,可見(jiàn),培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為1.5~3.0時(shí)有利于誘導(dǎo)腋芽分化,尤其以2.0~3.0時(shí)為。
2.2繼代增殖培養(yǎng)
取自同一種培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)、大小一致的繼代培養(yǎng)芽和莖段,同時(shí)接種到不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基中,培養(yǎng)30天后進(jìn)行觀察并統(tǒng)計(jì)結(jié)果(見(jiàn)表2)。
由表2可以看出,在NAA質(zhì)量濃度相同而6-BA質(zhì)量濃度不同的處理中,隨著6-BA濃度的升高(1.5~3.0)芽苗的增殖倍數(shù)也相應(yīng)提高,NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數(shù)高達(dá)6.6~6.8倍;可見(jiàn),培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為3.0、NAA質(zhì)量濃度為0.05時(shí)為的誘導(dǎo)腋芽分化的處理組合。
2.3生根培養(yǎng)
無(wú)菌芽苗在分化與增殖培養(yǎng)基中只誘導(dǎo)地上部分,既不斷地分枝增殖,曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開(kāi)花現(xiàn)象,但均不易生根。因此,將原來(lái)培養(yǎng)基中的大量元素減半(既1/2MS),并去除BA進(jìn)行根的誘導(dǎo)。結(jié)果在無(wú)菌苗根的誘導(dǎo)過(guò)程中,生長(zhǎng)素的種類(lèi)和使用濃度起決定性作用,為此對(duì)不同種類(lèi)的生長(zhǎng)素NAA、IBA、A、IAA的根效應(yīng)作對(duì)比試驗(yàn),結(jié)果表明,NAA、IBA對(duì)抗寒月季無(wú)菌苗誘根效應(yīng)明顯優(yōu)于IAA,但兩者之間差異不明顯,用IAA進(jìn)行根的誘導(dǎo),芽苗基部長(zhǎng)出較多的愈傷組織,發(fā)根率低,且發(fā)根量少,移栽成活率下降,這可能是因?yàn)樯L(zhǎng)過(guò)多的愈傷組織影響根系維管束的發(fā)育所致,為為了解NAA和IBA的適宜質(zhì)量濃度,進(jìn)行了NAA和IBA的質(zhì)量濃度試驗(yàn),分別設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質(zhì)量濃度進(jìn)行比較,培養(yǎng)30天后觀察根系生長(zhǎng)情況,表3表明,以1/2MS(大量元素用量減半)+NAA和1/2MS(大量元素用量減半)+IBA培養(yǎng)基對(duì)月季根的誘導(dǎo)效果均較為理想,而且濃度都在0.3-0.75mg/l范圍內(nèi)Zui為適合,但以NAA為。其中NAA生根率達(dá)92%,移栽成活率高達(dá)89%,IBA的生根率也高達(dá)90%,移栽成活率達(dá)87%。
將小苗接種到上述培養(yǎng)基中10天后其基部傷口基本愈合,18天則長(zhǎng)出許多小白根,培養(yǎng)30天發(fā)根率均達(dá)90%以上,且長(zhǎng)有3條以上,長(zhǎng)度達(dá)2.0厘米以上白根的占80%以上。
2.4煉苗移栽
在生根培養(yǎng)基中,無(wú)菌苗生長(zhǎng)迅速,植株逐漸健壯起來(lái),其根系生長(zhǎng)尤為迅速,在多數(shù)根系長(zhǎng)達(dá)1.0厘米,其根尖仍保持旺盛生長(zhǎng)狀態(tài),此時(shí)即可進(jìn)入過(guò)度栽培(煉苗)階段,移栽前先將瓶苗移出恒溫培養(yǎng)室,在常溫下置于較強(qiáng)散射光中煉苗7天,打開(kāi)瓶蓋后繼續(xù)煉苗2~7天,然后小心取出放入清水中清洗干凈,注意少傷根,移栽到以草碳土+珍珠巖(體積比1∶1)的基質(zhì)中,澆透水并覆蓋塑料膜,保持相對(duì)濕度85~90%,溫度15~25℃,10天后逐漸揭膜煉苗,15~20天可將塑料膜全部揭除,并澆施營(yíng)養(yǎng)液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng),其成活率一般可達(dá)70%以上,待小苗長(zhǎng)至10~15厘米左右時(shí),就可移植到田間定植。
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