玫瑰組織培養(yǎng)的意義
1.快速繁殖
玫瑰有性生殖能力差，大多觀賞價(jià)值高的品種不形成種子，種子繁殖不現(xiàn)實(shí)。而玫瑰實(shí)生苗觀賞價(jià)值較差，因此生產(chǎn)上必須通過野薔薇扦插再嫁接進(jìn)行繁殖。利用組織培養(yǎng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)玫瑰優(yōu)良品種的快速繁殖，并且能保持原有的優(yōu)良性狀不變。玫瑰組培增殖系數(shù)為４～５，半年至一年內(nèi)能獲得上百萬種苗。
2.獲得無病毒植株
玫瑰在生長過程中，能感染一種或數(shù)種病毒或類病毒。長期營養(yǎng)繁殖，如扦插、嫁接、分株，不僅不能脫毒，反而使病毒積累，嚴(yán)重影響玫瑰的品質(zhì)，導(dǎo)致玫瑰觀賞價(jià)值下降，比如花徑變小、色澤變淡、產(chǎn)花減少、斑點(diǎn)較多、花形不規(guī)則、易感染病蟲等。通過組織培養(yǎng)技術(shù)，利用玫瑰莖尖脫毒后，使玫瑰的種性得到復(fù)壯，生長勢增強(qiáng)，花徑增大，色澤鮮艷，抗病能力提高，產(chǎn)花量上升。
3.培育新品種
在組織培養(yǎng)過程中往往會發(fā)生芽變，芽變的結(jié)果導(dǎo)致花色變異、花的大小變異、花期變異、葉色變異、染色體數(shù)量變異等。在組織培養(yǎng)過程中，一旦發(fā)生芽變，準(zhǔn)確切取變異芽，并將其繁殖成完整植株，可產(chǎn)生有特殊觀賞價(jià)值的新品種。
4.種質(zhì)資源的保存
玫瑰種質(zhì)資源豐富，按傳統(tǒng)方法保存種質(zhì)資源占地面積大，且資源易受人為因素和環(huán)境因素的破壞而丟失。用組培方法，用極小的空間就可長期有效地保存玫瑰的種質(zhì)資源。
玫瑰組織培養(yǎng)的方法
1.外植體選取
從生長在田間或盆栽的優(yōu)良品種植株上，選取生長健壯、無病蟲害的當(dāng)年生枝條的莖尖和幼莖。取材在晴天正午，并且取用植株上部的幼莖。陰雨天或靠近地面的幼莖，表面污染較為嚴(yán)重，難于消毒。玫瑰除用莖尖和幼莖做外植體外，也可以用葉片、葉柄、根、莖、原生質(zhì)體、胚、花藥、子房、花萼和花托做外植體。
2.消毒滅菌及無菌苗的建立
取玫瑰外植體，用5%～10%的次氯酸鈉浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用無菌水清洗7～10次后接種。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒滅菌完畢后，將幼莖切割成05～10厘米長的至少帶有一個節(jié)的切段，接種于培養(yǎng)基中。
3.愈傷組織的誘導(dǎo)
Zui早報(bào)道從雜交茶香月季的莖上誘導(dǎo)了愈傷組織，該實(shí)驗(yàn)證明在培養(yǎng)基中添加2，4-D或添加NAA和激動素KT均能很快誘導(dǎo)出愈傷組織。隨后不同實(shí)驗(yàn)以不同品種為試驗(yàn)材料，從葉、葉柄、根、莖、原生質(zhì)體、合子胚、花藥、子房、花瓣、花萼、和花托成功地誘導(dǎo)了愈傷組織。
3.1愈傷組織的成功誘導(dǎo)與品種的基因型有關(guān)
2.3.2外植體類型：不同外植體愈傷產(chǎn)生的能力不同，葉為90%，根為70%，節(jié)間為55%，花藥為19%。
3.3激素
Rout等（1991）以Landora為材料，在添加BA和NAA，2，4-D的MS的培養(yǎng)基上，外植體在接種的7～12d后，在近軸面的葉柄和中脈處產(chǎn)生愈傷，愈傷組織誘導(dǎo)頻率高達(dá)92%。在接種后15～20d，外植體莖切端處產(chǎn)生愈傷，誘導(dǎo)率為76%。生長素種類和濃度對愈傷產(chǎn)生能力的影響同樣很大。早期實(shí)驗(yàn)多采用NAA結(jié)合BAP或BA等，近年來多采用2，4—D，并證明2，4—D是誘導(dǎo)愈傷的必要因素（Kintzios等，1999；Rout等，1996；vanderSalm等，1996；Vises—suwan等，1997）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)2，4-D對愈傷的誘導(dǎo)效果依賴于月季的基因型，如2，4—D濃度從113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培種“Care-freeBeauty”的愈傷誘導(dǎo)頻率，但該濃度則對另一個品種“GrandGala”無影響。對于“RedSunblaze”而言，當(dāng)濃度從113umol/L增加到452umol/L，則表現(xiàn)出愈傷的誘導(dǎo)率提高了，隨后當(dāng)2，4—D再增加，則顯著地降低愈傷的誘導(dǎo)頻率。愈傷組織在誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上能得到很好繼代培養(yǎng)（subculture、Li等，2002）。VanderSalm等（1996）證明2，4—D對誘導(dǎo)Rosepersica與xanthina和Moneyway產(chǎn)生愈傷是非常必要的，進(jìn)一步添加低濃度的BA有正效應(yīng)，但如BA濃度過高，則產(chǎn)生抑制作用。與以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，Kintzios等（1999）則發(fā)現(xiàn)2，4—D對愈傷誘導(dǎo)有負(fù)影響作用，可能因?yàn)椴捎玫耐庵搀w是成熟的葉片。
3.4合子胚的發(fā)育時期對愈傷的形成能力也有影響
處于心形胚的合子胚，其愈傷誘導(dǎo)率只有2%，子葉胚時的合子胚愈傷誘導(dǎo)率達(dá)到85%。
不定芽的誘導(dǎo)
月季的常規(guī)繁殖方式主要靠扦插、嫁接和壓條等，繁殖系數(shù)低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了生產(chǎn)的需要。80年代初，采取組織培養(yǎng)方法快速繁殖月季苗，用側(cè)芽、頂芽、并誘導(dǎo)生根。
增殖培養(yǎng)
玫瑰的增殖培養(yǎng)，一靠無菌苗切段繁殖，二靠誘導(dǎo)不定芽，形成從生苗；三靠愈傷組織形成體細(xì)胞胚或原球胚。將已長大的月季嫩莖切成帶1～2個節(jié)的莖段，投入新鮮的增殖培養(yǎng)基上，5～6周進(jìn)行一次繼代增殖，增殖系數(shù)平均達(dá)4～6。在外植到培養(yǎng)10～15d內(nèi)葉的葉原基伸長，第二葉片葉原基可見；15～20d側(cè)芽伸長；25～30d長度達(dá)6～10mm，繼代增殖會按幾何級數(shù)增長起來。增殖培養(yǎng)基可用不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，如MS+BA03～05+NAA0004～03mg/L。
壯苗與生根
壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：MS+BA03～05+NAA001～01或MS+BA03～05+IBA03。也可以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合二為一。玫瑰組培苗增殖與壯苗需光照10～12h，光照強(qiáng)度2000lx，溫度24～26℃。
一般情況下，玫瑰莖段組織培養(yǎng)8～10d內(nèi)則可生根。加入適量的活性炭有利于玫瑰生根。
煉苗與大田移栽
煉苗和大田移植是玫瑰微繁殖獲得成功的階段。組培幼苗由人為培養(yǎng)環(huán)境轉(zhuǎn)移到天然生長環(huán)境中，環(huán)境條件發(fā)生巨大變化，濕度大幅度降低，溫度不恒定，光照強(qiáng)烈，微生物多，故需煉苗過渡。一般玫瑰微繁殖煉苗需經(jīng)過室內(nèi)三天的取蓋煉苗，然后將苗從瓶中取出，洗去根部培養(yǎng)基，定植在珍珠巖、泥炭、蛭石或沙土中，用3～5%的多菌靈噴洗。煉苗時要注意基質(zhì)中的水分含量，水分太少，不能滿足苗生長發(fā)育；水分太多，導(dǎo)致爛苗。煉苗中、后期要注意通氣，給予足夠的光照，其幼苗成活率可達(dá)80％以上。
玫瑰組織培養(yǎng)中應(yīng)注的問題———褐化現(xiàn)象
褐化現(xiàn)象是指外植體在培養(yǎng)過程中切口產(chǎn)生的多酚類物質(zhì)被氧化成褐色的醌類物質(zhì)毒害植物自身，導(dǎo)致培養(yǎng)材料褐變死亡的現(xiàn)象。玫瑰在組織培養(yǎng)中褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，可采取以下措施：
1.采用適宜的外植體比如實(shí)生苗莖尖、枝條頂芽、幼胚等，在取外植體之前對母樹進(jìn)行遮光處理20～40d。
2.適宜的無基鹽分適宜的無基鹽分，降低蔗糖濃度，降低激素水平，加吸附劑05%～25%的活性炭可以減輕材料的褐變。
3.在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑和其他抑制劑如有機(jī)酸、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，氨基酸，硫脲，二氨基二硫化甲酸鈉，亞硫氫酸鈉，氰化鉀，二硫蘇糖醇多氨等，可有效的抑制褐變。
4.反復(fù)轉(zhuǎn)移，降低溫度，進(jìn)行暗培養(yǎng)，增大培養(yǎng)基硬度，是控制褐常用且有效的方法。
